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流式細胞儀的調試和校準

發布時間:2022-12-07

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   流式細胞儀是對細胞進行自動分析和分選的裝置。它可以快速測量、存貯、顯示懸浮在液體中的分散細胞的一系列重要的生物物理、生物化學方面的特征參量,并可以根據預選的參量范圍把指定的細胞亞群從中分選出來。多數流式細胞計是一種零分辨率的儀器,它只能測量一個細胞的諸如總核酸量,總蛋白量等指標,而不能鑒別和測出某一特定部位的核酸或蛋白的多少。也就是說,它的細節分辨率為零。
  流式細胞儀的調試和校準:
  流式細胞儀在使用前,甚至在使用過程中都要精心進行調試,以保證工作的可靠性和最佳性。調試的項目主要是激光強度、液流速度和測量區的光路等。
  激光強度:除調整反射鏡的角度以調整到所需波長的激光出光外,還要結合顯示屏上的光譜曲線使激光的強度輸出為最大。
  液流速度:可通過操作臺數字顯示監督,調節 氣體壓力大小以獲得穩定的液流速度。
  測量區光路調節?。哼@是調試工作的關鍵。需要保證在測量區的液流、激光束、90散射測量光電系統垂直正交,而且交點較小。一般可在用標準熒光微球等校準中完成。
  流式細胞術中所測得的量是相對值,因此需要在使用前或使用中對系統進行校準或標定,這樣才能通過相對測量獲得絕對的意義。因而FCM中的校準具有雙重功能:儀器的準直調整和定量標度。標準樣品應該穩定,有形成份形狀應是大小比較一致球形,樣品分散性能良好,且經濟、容易獲得。常用標準熒光微球作為非生物學標準樣品,雞血紅細胞做為生物學標準樣品。微球用樹脂材料制作,或標有熒光素,或不標記熒光素。所用的雞血紅細胞標準樣品制作過程昭下:取3.8%枸櫞酸或肝素抗凝的雞血(抗凝劑:雞血=1:4),經PBS清洗3次,再用5~10ml的1.0%戊二醛與清洗后的雞紅細胞混合,室溫下振蕩醛化24h,最后經PBS再清洗,貯4℃冰箱中備用。需要指出的是因為未經熒光染色,所測光信號為雞血紅蛋白的自發熒光。
  儀器的操作和使用
 ?、俅蜷_電源,對系統進行預熱;
 ?、诖蜷_氣體閾,調節 壓力,獲得適宜的液流速度;開啟光源冷卻系統;
 ?、墼跇悠饭苤屑尤肴ルx子水,沖洗液流的噴嘴系統;
 ?、芾眯蕵藴蕵悠?,調整儀器,使在激光功率、光電倍增管電壓、放大器電路增益調定的基礎上,0和90散射的熒光強度最強,并要求變異系數為最??;
 ?、葸x定流速、測量細胞數、測量參數等,在同樣的工作條件下測量樣品和對照樣品;同時選擇計算機屏上數據的顯示方式,從而能直觀掌握測量進程;
 ?、迾悠窚y量完畢后,再用去離子水沖洗液流系統;
 ?、咭驗閷嶒灁祿汛嫒胗嬎銠C硬盤(有的機器還備有光盤系統,存貯量更大),因此可關閉氣體、測量裝置,而單獨使用計算機進行數據處理;
 ?、鄬⑺杞Y果打印出來。
  操作和使用中的注意事項:
  1)光電倍增管要求穩定的工作條件,暴露的較強的光線下以后,需要較長時間的“暗適應”以消除或降低部分暗電流本底才能工作;另外還要注意磁屏蔽;
  2)光源不得在短時間內(一般要1h左右)關上又打開;使用光源必須預熱并注意冷卻系統工作是否正常;
  3)液流系統必需隨時保持液流暢通,避免氣泡栓塞,所使用的鞘流液使用前要經過過濾、消毒;
  4)注意根據測量對象的變換選用合適的濾片系統、放大器的類型等;
  5)特別強調每次測量都需要對照組。
 
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